Российские ученые разработали новый метод быстрого отбора клеток с генными модификациями.⁠⁠

Российские ученые из шести крупных научных организаций совместно разработали новую стратегию получения клеточных нокаутов, которая избавляет от долгой и кропотливой процедуры выращивания и скрининга клонов в целях поиска желаемой мутации. С результатами исследования можно ознакомиться в статье журнала Scientific Reports.

Настоящую революцию в генной инженерии произвело открытие системы CRISPR/Cas9. CRISPR – это короткие повторяющиеся участки в ДНК (дословно «сгруппированные короткие палиндромные повторы»), которые вместе с белками Cas (дословно «белки, связанные с CRISPR») представляют собой своеобразный аналог иммунитета у бактерий, они помогают микроорганизмам защищаться от вирусов. CRISPR хранят в себе информацию о вирусах, ранее атаковавших бактерии, а Cas разрезают вирусную ДНК для дальнейшего уничтожения. С 2013 года мировое научное сообщество начало применять эту систему для редактирования генов не только бактерий, но и высших организмов (активно проводятся первые эксперименты на клетках человека), что открывает новые возможности для лечения всевозможных болезней человека, включая тяжелейшие вирусные, онкологические и наследственные (например, ВИЧ, синдром Дауна и др.)

«Разработанный нами новый метод отбора редактированных клеток заключается в том, что клетки с искомой генной модификацией экспонируют на своей поверхности короткий пептид. С помощью антитела к данному пептиду и, используя метод клеточной сортировки, можно легко и быстро выделить желаемые клетки-нокауты по любым генам, в том числе продукты которых находятся внутри клетки или секретируются во внешнюю среду. Генетическая конструкция, которую мы разработали, и которая позволяет пептиду транспортироваться на поверхность клетки и одновременно выключать ген, является самой короткой, но в тоже время эффективной среди существующих в настоящее время маркеров селекции. Мы назвали наш метод SORTS (surface oligopeptide knock-infor rapid target selection), аббревиатура которого в переводе близка к слову «сортировка» и отражает суть нового метода. SORTS оказался полезным не только для необратимой инактивации гена, но и для регулируемого с помощью так называемого дегрона выключения гена на уровне белка, что позволяет изучать функцию жизненно важных генов», — комментирует руководитель группы клеточных и генных технологий Института биологии гена РАН Дмитрий Мазуров.

Метод обеспечивает быстрый и эффективный отбор полученных нокаутов без длительного и трудоемкого метода клонирования клеток, что позволяет быстро и надежно получить три линии генетически отредактированных клеток эмбриональных почек человека, нокаутных по содержанию митохондриальных поринов. Применение этого метода, по утверждению авторов, «подходит для любых генов, а также может иметь дополнительные преимущества по сравнению с уже имеющимися методами молекулярной биологии». На примере клеточных культур человека, зараженных ВИЧ, авторский коллектив уже продемонстрировал возможность уничтожения данного вируса, ДНК которого стабильно встраивается в геном человека и не может быть удалена современными средствами лечения. Работа в этом направлении продолжается.

Источник: https://indicator.ru/news/2019/04/13/bystrogo-otbora-kletok-...